公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝癌細胞;HepG2[HepG2] | 貼壁生長 | EY-X63237 |
細胞名稱 肝癌細胞;HepG2[HepG2]
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞來源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。該細胞表達甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗、轉鐵蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、結合珠蛋白、銅藍蛋白、纖溶酶原、補體C4、C3激活物、纖維蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、結合蛋白;表達胰島素受體和胰島素樣生長因子IGFⅡ的受體;該細胞具有3-羥基-3-甲酰還原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未證明該細胞中有HBV基因組。
培養條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
傳代方法: 1:4~1:6傳代;每周2次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蟾蜍他靈;和蟾毒他靈(標準品)DKK1 (D5V6L) Rabbit mAb2,二硝基
蟾毒它靈(標準品)Phospho-MARK Family (Activation Loop) Antibody2-甲氧基-
黃尿酸RecQL1 (Q1N3) Mouse mAb衣康酸
舒巴坦酸JAKMIP1 Antibody甲基酸丁酯
舒巴坦酸(標準品)Cox1 Antibody二二甲基酸酯
沙蟾毒精(標準品)Cox2 Antibody溴異惡唑
坦西莫司,脂化物Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)三基
聯雙酯(標準品)COX IV Antibody2-基-1-丁
聯雙酯RANK Antibody2-基丁
富馬酸盧帕他定DOCK180 (C4C12) Rabbit mAb糠
富馬酸盧帕他定(標準品)Mre11 (31H4) Rabbit mAb2-噻吩甲
正辛基*基,八烷基*基Mre11 (31H4) Rabbit mAb叔丁基
酮麝香(標準品)DNMT3B (E4I4O) Rabbit mAb (Mouse Specific)6-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯
甲酰基十字孢(PKC-412)N-WASP (30D10) Rabbit mAb基三硅烷
無水鄰菲啰啉;1,10-菲羅啉N-WASP (30D10) Rabbit mAbN-Boc-2-哌啶甲酸
鄰菲啰啉一水;1,10-菲羅啉一水COX IV (3E11) Rabbit mAb間硝基三氟甲
鄰菲啰啉鹽酸鹽一水;1,10-菲羅啉鹽酸鹽COX IV (3E11) Rabbit mAb防染鹽S
EDTA二鈉, 二四酸二鈉鹽
肝癌細胞;HepG2[HepG2]小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒ALV-AGELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PA)ELISA試劑盒AMAC-1ELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒AmAC-1ELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠組織蛋白去乙?;?HD)ELISA試劑盒AmAC-1ELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒AMAC-1ELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產品規格:48T/96T。
小鼠過敏素/補體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產品規格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。